光散射法用于膜蛋白結構研究

  膜蛋白和脂質體組成生物膜,生物膜對生命起 著重要的作用。為了弄清膜蛋白在組成生物膜中所 起的作用及功能,了解膜蛋白的結構非常重要。 

膜蛋白通常只溶解在膠束溶液中,因此表征脂 質體溶劑中低聚態的膜蛋白相當困難。本文利用多 角度激光光散射儀（MALS）、紫外檢測器（UV）與 示差折光檢測器（DRI）聯用技術測定蛋白核、脂 質體膠束、蛋白-脂質體復合物分子量以及各組分的 含量。

圖 1 是膜蛋白經 SEC 色譜柱分離后的色譜圖。 其測定系統組成為:DAWN MALS多角度激光光散 射儀、（280nm）紫外檢測器、示差折光檢測器。

為了保持溶液狀態的膜蛋白,必須使含有脂質 體膜蛋白在流動相中的濃度比其臨界膠束濃度高。 因為膜蛋白-脂質體配合物具有與標準球蛋白非常 不同的構型,所以它們對色譜柱填料也有非常不同 的吸附特性以及洗脫特征曲線。因此,采用傳統的 色譜柱校準法依據洗脫時間來確定膜蛋白的分子量 所得數據可信度極大降低。

而采用 MALS、UV 和 DRI 聯用技術可測得膜蛋 白核、脂質體膠束及蛋白-脂質體復合物的分子量。 如圖 2 所示。此圖表明蛋白-脂質體復合物中的膜蛋 白是以單體狀態存在（分子量為 62kDa）。

本實驗清晰的表明 MALS、UV 和 DRI 聯用技術 是一種*的、功能強大的表征膜蛋白的手段;不 僅如此,該方法同樣適用于表征蛋白類修飾復合物, 如:聚乙二醇 PEG 蛋白、糖基化蛋白等。

圖 1:表示膜蛋白的 MALS（上）、UV（中）以及 DRI（下）的色譜圖信號

光散射法用于膜蛋白結構研究 

This note graciously submitted by David Veesler, Architecture et Fonction des Macromolécules Biologiques, Unité Mixte de Rech- erches UMR6098, CNRS, de Provence Université de la Méditerranée, Marseille France.

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